《分解纖維素的微生物的分離》生物課教案

　　纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類(lèi)物質(zhì)。

　　纖維素與纖維素酶

　�。�1）棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。

　�。�2）纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長(cháng)提供營(yíng)養。

　　纖維素分解菌的篩選

　�。�1）篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過(guò)顏色反應直接對微生物進(jìn)行篩選。

　�。�2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理

　　剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。當我們在含有纖維素的培養基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復合物就無(wú)法形成，培養基中會(huì )出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。

　　分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗流程

　　土壤取樣→選擇培養（此步是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來(lái)確定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落

　�。�1）土壤采集 選擇富含纖維素的環(huán)境。

　�。�2）剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟 倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板

　�。�3）剛果紅染色法種類(lèi)

　　一種是先培養微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應，另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅。

　　課題延伸

　　對分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測定。

　　疑難解答

　�。�1）為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？

　　由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的.微生物的幾率要高于普通環(huán)境。

　�。�2）將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應該埋進(jìn)土壤多深？

　　將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實(shí)際上是人工設置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應將紙埋于深約10c左右腐殖土壤中。

　�。�3）兩種剛果紅染色法的比較

　　方法一是傳統的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì )使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題，缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類(lèi)物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現假陽(yáng)性反應。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因為培養基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區分。方法二的另一缺點(diǎn)是：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長(cháng)時(shí)間培養過(guò)程中會(huì )降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區分。

　�。�4）為什么選擇培養能夠“濃縮”所需的微生物？

　　在選擇培養的條件下，可以使那些能夠適應這種營(yíng)養條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應這種營(yíng)養條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。

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