Fascin蛋白對OLP發(fā)生的作用論文
本文作者：杜勇、陳宇、李浩渤 單位：河北醫科大學(xué)第二醫院口腔內科、河北省廊坊市人民醫院口腔科
口腔扁平苔蘚(orallichenplanus，OLP)是口腔黏膜一種常見(jiàn)的非感染性慢性炎癥，目前被認為是細胞介導的自身免疫性疾病。國內外研究相繼表明OLP具有癌變傾向，其癌前性質(zhì)引起廣泛關(guān)注［1］。Fascin蛋白是一種細胞骨架蛋白，Fascin蛋白的異常表達可引起腫瘤細胞運動(dòng)性顯著(zhù)增強和細胞黏附能力的改變，使腫瘤細胞具有更強的侵襲性，進(jìn)入淋巴間隙，淋巴管和血管，增加轉移幾率。研究發(fā)現fascin蛋白在多種腫瘤組織和癌前病變組織中呈現陽(yáng)性表達，其陽(yáng)性表達的腫瘤組織學(xué)分級或者侵襲性往往較高［1－3］。進(jìn)一步的研究發(fā)現Fascin蛋白在口腔白斑和口腔鱗狀細胞癌中呈現過(guò)高表達［4，5］。本研究通過(guò)免疫組化的試驗方法檢測fascin蛋白在OLP中的表達，進(jìn)一步探討OLP癌變的發(fā)病機制，為OLP癌變的早期診斷和治療提供依據。
1資料與方法
1．1一般資料
收集河北醫科大學(xué)第二醫院1995至2009年OLP蠟塊標本52例(所有患者在取標本前未經(jīng)任何治療)為試驗組(OLP組)，每例標本均進(jìn)行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗的病理醫師閱片后確診。其中男28例，女24例;年齡38～73歲，平均年齡52．6歲。正�？谇火つそM織41例為對照組(NM組)，均取自囊腫旁及牙槽骨整形手術(shù)時(shí)切除的正常黏膜組織，每例均進(jìn)行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗的病理醫師閱片后確診。其中男22例，女19例;年齡21～68歲，平均年齡31．6歲。2組一般資料有均衡性。
1．2主要試劑與儀器
試劑:SP免疫組化試劑盒、一抗(購自博士德分裝抗體)、二氨基聯(lián)苯劑(DAB)顯色劑、多聚賴(lài)氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑均購于河北博海生物有限公司。儀器:顯微鏡(日本奧林巴斯BX51T-PHD-J11)、CMOS(日本奧林巴斯)、多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(美國MediaCy-bernetics公司Image-ProPlus)、切片機(德國萊卡RM2015)、離心機(北京離心機廠(chǎng)LDZ5-2型)、電子天平(瑞士METTERAE100型)、移液器(德國EPPENDORF)、干燥箱(日本三洋MIR-153型)、低溫冰箱(日本三洋MDF-382E型)、恒溫水浴箱(江蘇太倉醫用儀器廠(chǎng)DSHZ-300型)、醫用微波爐(浙江臨安愛(ài)迪儀器廠(chǎng)YWY781B型)。
1．3對照試驗
用已知的Fascin蛋白陽(yáng)性的口腔鱗癌標本作為陽(yáng)性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。
1．4試驗方法
采用免疫組織化學(xué)SP法(過(guò)氧化物酶標記的鏈酶卵白素法)。所有標本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個(gè)蠟塊切為5μm的切片，共切3張，1張HE染色，1張作為陰性對照，1張Fascin蛋白染色。
1．5結果判定
Fascin蛋白染色判定參照Hashimoto的標準，以細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色，每張切片隨機計數10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計數100個(gè)細胞。據陽(yáng)性細胞百分率判定:(1)未見(jiàn)棕黃色顆粒為陰性;(2)＜25%為弱陽(yáng)性(+);(3)25%～75%為陽(yáng)性(++);(4)＞75%為強陽(yáng)性(+++)。1．6統計學(xué)分析應用SPSS17．0統計軟件，計數資料比較采用2檢驗，P＜0．05為差異有統計學(xué)意義。
2結果
2．12組Fascin陰性率比較
黏膜標本中均呈陰性表達;NM組標本呈現弱陽(yáng)性表達(陽(yáng)性細胞數＜25%)，細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒，其余均呈現陰性表達，陽(yáng)性率為9．62%，陽(yáng)性率高于NM組(2=4．166，P＜0．05)。圖1、2。
2．2OLP組Fascin蛋白與性別、年齡的關(guān)系
在性別和年齡的對照中，fascin蛋白在口腔扁平苔蘚中的'表達差異無(wú)統計學(xué)意義(P＞0．05)。見(jiàn)表1。
3討論
Fascin蛋白在細胞的遷移、黏附等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Fascin蛋白能夠與F-肌動(dòng)蛋白結合成平行有序的束狀結構，這種結構能夠有效地加強肌動(dòng)蛋白細胞骨架，抵抗細胞遷移時(shí)由細胞突起的運動(dòng)引起的細胞膜延伸，從而對細胞移動(dòng)起著(zhù)重要作用。Fascin蛋白的表達與腫瘤的分化增殖、細胞遷移及浸潤侵襲密切相關(guān)，為腫瘤早期診斷和預后的判定提供重要的依據。研究證實(shí)Fascin蛋白在正常黏膜中不表達或低表達，而在癌組織中高表達［1－3］。國內試驗證實(shí)口腔鱗狀細胞癌的Fascin蛋白表達顯著(zhù)高于正常黏膜組織［4，5］。王德明［5］還發(fā)現在癌旁正常的口腔黏膜組織中也有Fascin蛋白的表達，12例口腔黏膜良性增生組織中2例出現Fascin蛋白表達。但未見(jiàn)報道在癌前病變OLP中Fascin蛋白的表達情況。本實(shí)驗應用免疫組織化學(xué)法檢測了Fascin蛋白在41例正�？谇火つ吮竞�52例OLP標本中的表達。NM組中Fascin蛋白均呈陰性表達;OLP組中5例標本呈現弱陽(yáng)性表達(陽(yáng)性細胞數＜25%、細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒)，其余均呈現陰性表達，陽(yáng)性率為9．62%，陽(yáng)性表達率高于正�？谇火つ�(P＜0．05)，這與以往的研究［6］相近，正常食管黏膜中Fascin蛋白呈陰性表達或低表達，而在癌前病變食管黏膜的不典型性增生中Fascin蛋白呈現陽(yáng)性表達，隨著(zhù)食管癌的發(fā)展Fascin蛋白的陽(yáng)性表達是逐漸增強的。本實(shí)驗結果顯示OLP中Fascin蛋白的陽(yáng)性率高于正�？谇火つ�，說(shuō)明OLP存在潛在惡變的可能，Fascin蛋白可能在OLP惡變的過(guò)程中發(fā)揮一定的作用。但尚不能揭示Fascin蛋白與OLP惡變存在直接關(guān)系，Fascin蛋白在OLP惡變發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制仍需要進(jìn)一步的研究。
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