論文精選：《如何科學(xué)地開(kāi)設生化實(shí)驗》
【摘 要】
隨著(zhù)我國醫學(xué)教育改革的不斷深入，醫學(xué)教育的目標已發(fā)展為培養高素質(zhì)、強能力、具有創(chuàng )新精神的綜合型人才。醫學(xué)實(shí)驗教學(xué)是培養醫學(xué)人才的重要環(huán)節，根據我院的實(shí)際情況，生化實(shí)驗的實(shí)驗項目按照“基礎性實(shí)驗”“綜合性實(shí)驗”“設計創(chuàng )新性實(shí)驗”三大板塊進(jìn)行開(kāi)設，聯(lián)系后續課程內容及臨床。然而我院本科醫學(xué)生的生化實(shí)驗，有一部分實(shí)驗受到了學(xué)時(shí)不足、開(kāi)設難度大的限制，為了解決這一難題，我們生化實(shí)驗室運用了“倒敘法”合理縮短了學(xué)時(shí)，科學(xué)地開(kāi)設實(shí)驗。下面我將就我們實(shí)驗室開(kāi)設的幾個(gè)采用“倒敘法”的實(shí)驗進(jìn)行闡述。
【關(guān)鍵詞】
生化實(shí)驗 倒敘法 科學(xué)
為了適應高等醫學(xué)院�；A醫學(xué)實(shí)驗教學(xué)的發(fā)展要求，培養醫學(xué)生的實(shí)踐能力和創(chuàng )新能力，我院針對全院本科醫學(xué)生的生物化學(xué)教學(xué)內容進(jìn)行了合理地調整，增加了有利于學(xué)習掌握生物化學(xué)新技術(shù)、培養學(xué)生科研能力的較大型綜合創(chuàng )新性實(shí)驗。原則上我院要求本科生生物化學(xué)實(shí)驗在四學(xué)時(shí)內完成，然而聚丙烯酰胺凝膠盤(pán)狀電泳、醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)和蔗糖酶與淀粉酶的專(zhuān)一性這幾個(gè)實(shí)驗，四個(gè)學(xué)時(shí)是遠遠不夠的。在教學(xué)要求與教學(xué)條件的矛盾沖突下，我們實(shí)驗室就采用“倒敘法”來(lái)順利完成這些實(shí)驗。
聚丙烯酰胺凝膠盤(pán)狀電泳實(shí)驗按照正常的操作順序應該是：1.制備分離膠;2.制備濃縮膠;3.準備電泳槽;4.上樣;5.電泳;6.剝膠;7.固定、染色、漂洗;8.觀(guān)察結果。而我們實(shí)驗室則采用“倒敘法”，第一輪實(shí)驗所需要的凝膠包括分離膠和濃縮膠都由實(shí)驗室的老師準備就緒，往后每一輪實(shí)驗所需的凝膠由上一輪實(shí)驗的同學(xué)制備，將這個(gè)實(shí)驗分段同時(shí)進(jìn)行。具體操作則變?yōu)椋?.準備電泳槽;2.上樣;3.電泳（電泳所需要的時(shí)間大概為一個(gè)小時(shí)左右，在這一個(gè)小時(shí)跑電泳的時(shí)間里，我們可以完成后續的實(shí)驗內容）;4.制備分離膠;5.濃縮膠制備;6.剝膠;7.固定與染色、脫色;8.觀(guān)察結果。要合理地運用時(shí)間來(lái)完成這個(gè)實(shí)驗。
醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)的實(shí)驗中，我們也是先電泳以后再具體講原理和操作步驟以及方法。按照正常的程序應該是先講實(shí)驗目的、實(shí)驗原理、實(shí)驗器材與試劑，然后再重點(diǎn)講解實(shí)驗步驟，講完以后同學(xué)們再開(kāi)始操作。然而我們先簡(jiǎn)單地介紹一下實(shí)驗操作，然后開(kāi)始點(diǎn)樣，點(diǎn)完樣以后再上樣和進(jìn)行電泳。電泳跑上了以后我們再繼續接著(zhù)講實(shí)驗目的、實(shí)驗原理、實(shí)驗器材與試劑，再詳細介紹實(shí)驗步驟，及每一個(gè)步驟需要注意的注意事項。薄膜準備：一般要浸泡半個(gè)小時(shí)以上，每一次都由實(shí)驗室的老師先準備好;儀器準備：剪裁尺寸合適的“濾紙橋”是用來(lái)聯(lián)系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的中間 “橋梁”（也由實(shí)驗室的老師準備好）;點(diǎn)樣;電泳：調節電壓，預電泳（50V，5min），然后再調節至120V左右，通電45分鐘，待電泳區帶展開(kāi)至薄膜三分之二處時(shí)，停止通電;染色：用鑷子小心將薄膜取出，浸于氨基黑10B染色液中染色1-3分鐘;漂洗：漂洗3次干凈的薄膜用濾紙吸干，可見(jiàn)5條界限清晰的區帶;定量分析：剪下薄膜各蛋白色帶分別放入NaOH溶液中，30分鐘后去測其吸光度值;計算：計算各蛋白的相對百分含量和A/G比值。這樣就有效地縮短了學(xué)時(shí)，圓滿(mǎn)地完成了實(shí)驗。
蔗糖酶與淀粉酶的專(zhuān)一性實(shí)驗中，實(shí)驗的`操作步驟：1.酵母蔗糖酶提出液制備：取鮮酵母（面包酵母）1小勺，放在小試管內，倒入甲苯1～2ml，用粗玻璃棒攪拌約30～45分鐘使酵母液化，然后加蒸餾水3～5ml，充分混勻。3000轉/分離心10分鐘，傾棄上清液，保留沉淀于小試管中，加蒸餾水1.5ml，甲苯0.2ml，混勻，在30℃水浴中過(guò)夜。次日取出，用玻璃棒攪勻，一邊攪拌一邊加3～5%稀醋酸，調節pH至3.5～4.0（用pH試紙測試），離心（3000轉/分）10分鐘。將上清液傾入潔凈的燒杯內，加入少量硅藻土（約一小匙），混勻，3000轉/分離心5分鐘。上清液用氨水中和至pH 5左右，放4℃冰箱保存備用。使用前可根據實(shí)驗需要的活性大小適當稀釋。2.準備稀釋唾液（淀粉酶的來(lái)源）：實(shí)驗者先用水漱口，然后含一口蒸餾水于口中輕漱一、二分鐘，吐入小燒杯中。3.取6支試管按表格依次加入試劑，每管混勻后置于37℃恒溫水浴中保溫30min。另取大試管6支，每支試管中加Benedict試劑1ml（約20滴），加熱煮沸后，分別將保溫后的試管中的液體加入之，繼續煮沸2分鐘，放試管架上冷卻，觀(guān)察并記錄結果。解釋實(shí)驗結果。操作步驟中要求在30℃水浴中過(guò)夜，所以過(guò)夜這一部分的內容由實(shí)驗室的老師提前給同學(xué)們準備好。同學(xué)們從次日取出開(kāi)始操作，做完以后在保溫的30min時(shí)間里再做過(guò)夜的這一部分，做完又可以給下一個(gè)班的同學(xué)使用。這樣輪回倒轉法使我們的實(shí)驗有序完成。
這些實(shí)驗運用“倒敘法”在我院已通過(guò)多年的實(shí)踐，在圓滿(mǎn)完成本實(shí)驗的全面教學(xué)的同時(shí)，讓原來(lái)的四個(gè)學(xué)時(shí)完成不了的成為可能，既滿(mǎn)足了人才培養的教學(xué)需要，又克服了學(xué)時(shí)不足的現實(shí)條件，為實(shí)現創(chuàng )新人才培養目標、促進(jìn)實(shí)驗教學(xué)改革奠定了基礎。
【參考文獻】
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