豬乙型腦炎痘苗和檢測技術(shù)研究進(jìn)展論文
豬乙型腦炎又稱(chēng)日本乙型腦炎，由黃病毒科黃病毒屬乙型腦炎病毒引起，是一種急性中樞神經(jīng)系統人獸共患傳染病，國際獸醫局將該病列為B類(lèi)傳染病。該病不僅危害集約化養豬業(yè)，造成巨大的經(jīng)濟損失，也影響人類(lèi)健康，嚴重威脅公共衛生安全。目前尚無(wú)有效的治療方法，強化檢測技術(shù)和疫苗質(zhì)量的提高是控制該病的有效手段，現將豬乙型腦炎疫苗和檢測技術(shù)的研究進(jìn)展情況進(jìn)行綜述。
1 疫苗研究進(jìn)展
1.1 常規疫苗
目前，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中用于預防豬乙型腦炎的常規疫苗有滅活苗和減毒活疫苗，其中滅活苗由北農科院畜牧獸醫研究所采用豬乙型腦炎強毒株WH-1株研制成功，并于1996年獲準投入市場(chǎng)，該疫苗接種各類(lèi)豬群后無(wú)應激反應、胎內感染及病毒血癥，安全性好，保護率高，但是存在免疫保護期短、免疫劑量大等不足之處。減毒活疫苗也由湖北農業(yè)院畜牧獸醫研究所研發(fā)，其使用SA14-14-2毒株，經(jīng)接種地鼠腎原代細胞增殖，將病毒液凍干制成。研究表明，病毒活疫苗安全性高、免疫原性好，特別是對后備母豬及初產(chǎn)母豬可產(chǎn)生高效的細胞免疫和體液免疫。缺點(diǎn)在于可能出現毒力返強，存在潛在的致病危險，同時(shí)地鼠腎原代細胞未通過(guò)WHO認證，這嚴重影響了疫苗的應用范圍。
1.2 基因工程疫苗
隨著(zhù)分子生物學(xué)、分子免疫學(xué)、基因工程學(xué)等生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員對豬乙型腦炎基因工程疫苗進(jìn)行了大量的研究，取得一系列成果。
近年來(lái)，科研人員采用反向遺傳學(xué)基因工程技術(shù)構建嵌合病毒作為防治豬乙型腦炎的新型疫苗，即：重組嵌合病毒疫苗。如將豬乙型腦炎病毒的E基因替換豬瘟病毒的.E基因，構建豬乙型腦炎-豬瘟嵌合病毒，免疫小鼠及豬后，均產(chǎn)生了乙型腦炎病毒特異性抗體。將豬乙型腦炎病毒的prM和E基因代替黃熱病毒的同種基因，構建乙型腦炎-黃熱嵌合病毒，實(shí)驗證明，具有較高的安全性和特異性抗體水平，免疫抗體轉陽(yáng)率達99.1%，并且已在澳大利亞注冊成功。同時(shí)，構建成功的含有豬乙型腦炎病毒prM或E基因的重組痘苗病毒，免疫小鼠和豬后也可防護豬乙型病毒的攻擊。
核酸疫苗作為另一類(lèi)基因工程疫苗也取得了大量的研究成果。目前的研究主要集中在豬乙型腦炎病毒的prM、E和NS1基因上，Ashok NS等證實(shí)了含有E基因的核酸疫苗保護作用有限，僅刺激抗體產(chǎn)生低水平的細胞免疫，而含部分E基因的核酸疫苗則在小鼠體內產(chǎn)生了較高的中和抗體水平和細胞免疫反應，對其保護率可達71%。Konishi等證實(shí)采用含有豬乙型腦炎前膜信號肽（s）prM、E基因的核酸疫苗免疫小鼠后，保護率可達100%，免疫持續期為6個(gè)月。隨后其又證實(shí)了含有prM和E基因的核酸疫苗免疫動(dòng)物后，不僅刺激抗體產(chǎn)生特異性CTL細胞參與細胞免疫，還產(chǎn)生B細胞參與體液免疫。對于含有NS1基因的核酸疫苗，Lin等證明了雖在小鼠體內未檢測到中和抗體，但存在很強的補體反應，可促小鼠獲得90%的保護，但是含NS1基因的核酸疫苗的免疫效果與采用的表達系統和其序列有關(guān)。雖然豬乙型腦炎病毒核酸疫苗的研究取得了顯著(zhù)的成果，但是其安全性、免疫途徑等因素仍需進(jìn)一步論證，現仍處在實(shí)驗室研究階段。
另一類(lèi)豬乙型腦炎病毒新型疫苗為亞單位疫苗，XuXG等利用桿狀病毒表達系統表達的豬乙型腦炎E蛋白，免疫小鼠和豬，在動(dòng)物體內檢測到特異性中和抗體。我國的曹瑞兵等構建了表達豬乙型腦炎病毒多表位抗原的病毒樣顆粒疫苗，證實(shí)疫苗在小鼠身上與豬乙型腦炎弱毒疫苗的免疫效果相近。但是目前為止，亞單位疫苗也是仍處于實(shí)驗階段。
2 檢測技術(shù)研究進(jìn)展
隨著(zhù)對豬乙型腦炎研究的深入，其檢測技術(shù)有了很大的進(jìn)展。
2.1 血清學(xué)檢測技術(shù)
目前常用的有酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫熒光試驗、補體結合試驗、血凝抑制試驗、乳膠凝集試驗、協(xié)同凝集試驗。其中酶聯(lián)免疫吸附試驗作為一種敏感、特異、穩定的檢測技術(shù)在豬乙型腦炎的檢測中得到了廣泛的應用。沈婷等建立的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗方法，用于檢測豬乙型腦炎病毒抗體，與同類(lèi)方法比較，吻合率達95.6%，且具有較高的敏感性與特異性，并對江蘇等4省開(kāi)展了1089份樣的血清流行病毒調查，獲得了較好的效果。補體結合試驗對診斷豬乙型腦炎有較高的特異性，但因補體結合抗體在動(dòng)物發(fā)病后兩周才出現，故該法也只能作為回顧診斷用。血凝抑制試驗可以檢測豬乙型腦炎病毒IgM和IgG抗體，敏感性強，操作簡(jiǎn)單，是常用的豬乙型腦炎流行病學(xué)和臨床診斷方法。而賈杏林等建立的豬乙型腦炎乳膠凝集試驗，與血凝抑制試驗相比，對同一組樣品的檢測結果差異不顯著(zhù)（P>0.05），且具有快速、易于判斷、不需特殊儀器的優(yōu)點(diǎn)，適合基層單位推廣使用。宋大偉等建立的豬乙型腦炎協(xié)同凝集試驗，產(chǎn)生的凝集現象肉眼可以判斷，與酶聯(lián)免疫吸附試驗相比，簡(jiǎn)單、快捷、敏感性高、特異性強，也適合基層單位推廣使用。王吉等建立的免疫熒光試驗，結果表明，靈敏度是乳膠凝集試驗的8倍，可用于豬乙型腦炎的確診，但是由于其操作繁瑣，血清中的非特異性吸附等因素，限制了診斷方法的應用。
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