麒麟竭中龍血素A的藥動(dòng)力學(xué)研究論文示例
1儀器與材料
1.1動(dòng)物
SD大鼠66只,體質(zhì)量(250±20)g,雌雄兼備,由中山大學(xué)醫學(xué)院動(dòng)物中心提供,合格證號:(粵)2006A064。
1.2儀器
Waters高效液相色譜儀:515 HPLC泵,2487雙波長(cháng)吸收監測器,N-2000雙通道色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所);TDL80-2B臺式離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng));SCQ5201超聲儀(上海超聲波儀器廠(chǎng));ZH-2 BLENDER渦旋混合器(天津藥典標準儀器廠(chǎng))。
1.3材料
廣西產(chǎn)龍血竭(廣西中醫學(xué)院制藥廠(chǎng)提供);龍血素A對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號:200402);乙腈、甲醇(色譜純),乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、冰醋酸(分析純)。
2方法與結果
2.2血樣的采集和處理
大鼠禁食(自由飲水)12 h后,按100 g大鼠給予龍血竭250 mg,灌胃給藥。分別在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于頸動(dòng)脈取血,置于用肝素預處理過(guò)的離心管中。取全血1 mL置離心管中,加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL,渦旋混合均勻,3 000 r·min-1離心10 min,取上清液,提取3次,合并上清液,50 ℃水浴揮干,于殘渣中加入100 μL甲醇,超聲處理使之溶解,12 000 r·min-1離心10 min,取上清液作為樣品,注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定,記錄色譜圖與峰面積,采用外標法定量。
2.3方法學(xué)考察[3]
2.3.1龍血素A對照品貯備液的制備取龍血素A對照品,用甲醇配制成每1 mL約含100 μg的溶液,作為對照品貯備液。
2.3.2方法專(zhuān)屬性取大鼠2只,實(shí)驗前禁食12 h,自由飲水,1只做空白對照,1只按100 g給予龍血竭250 mg灌胃給藥,給藥2 h后取血樣,按“2.2”項下方法操作測定。由圖1可見(jiàn),全血中的內源性物質(zhì)不干擾龍血素A的測定,表明本方法有較好的.專(zhuān)屬性。[PSD261;S*2〗A.空白血漿; B.空白血漿+對照品; C.樣品圖1 HPLC圖譜Figure 1HPLC chromatograms
2.3.3標準曲線(xiàn)與最低檢測限取空白全血適量,精密加入龍血素A對照品儲備液,配制質(zhì)量濃度為0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列濃度標準溶液,按“2.2”項下的方法,自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起,依法操作,記錄峰面積。以質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標,峰面積(A)為縱坐標進(jìn)行回歸,結果表明龍血素A的質(zhì)量濃度在0.076~4.836 μg·mL-1范圍內與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好,回歸方程為:A=49679ρ+2784.3,r=0.998 3(n=7)。取標準曲線(xiàn)用溶液,逐步稀釋至溶液中龍血素A的響應值約為基線(xiàn)噪音的3倍(S/N=3),記錄色譜圖,得出最低檢測限(LOD)為0.025 μg·mL-1。
2.3.4相對回收率與精密度精密量取對照品儲備液,以空白全血分別配成高、中、低3種質(zhì)量濃度(4.836、1.209、0.076 μg·mL-1)的樣品溶液,按 “2.2” 項下的方法,自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起,依法操作。記錄峰面積并代入標準曲線(xiàn)計算各樣品濃度,計算相對回收率。結果表明,高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品的相對回收率均高于80%。見(jiàn)表1。取以上高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品溶液于同一天內連續測定3次,計算日內RSD;每天測定3種濃度樣品各1次,連續測定3 d,計算日間精密度RSD。結果日內和日間精密度RSD值均小于10%,表明該法精密度較好。見(jiàn)表1。
2.3.5樣品穩定性精密量取對照品儲備液,以空白全血配制質(zhì)量濃度為0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的樣品,分別考察室溫25 ℃放置0、4、12、24 h,-20 ℃冰箱放置24 h,-20 ℃下反復凍融3次的穩定性。結果各樣品的RSD值均在2.76%~11.42%(n=6)之間,符合《中國藥典》相關(guān)規定,表明樣品穩定性較好。
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