淺論婦科養坤丸質(zhì)量標準探究論文

　　【摘要】目的建立婦科養坤丸的質(zhì)量標準，以更好控制產(chǎn)品質(zhì)量。方法采用薄層色譜（TLC）法鑒別黃芩、木香、延胡索、甘草，以HPLC法測定黃芩苷的含量。結果TLC法可檢出黃芩、木香、延胡索、甘草，斑點(diǎn)清晰，陰性對照無(wú)干擾，專(zhuān)屬性強。黃芩苷在0.0576～1.44μg范圍內線(xiàn)性良好(r=0.9999)，平均加樣回收率為97.85%，RSD為0.86%。結論實(shí)驗方法定性、定量方法簡(jiǎn)便、可靠、準確，可用于婦科養坤丸的質(zhì)量控制。

　　【關(guān)鍵詞】婦科養坤丸黃芩苷薄層色譜高效液相色譜

　　1器材

　　1.1儀器

　　DionexSummit高效液相色譜儀(P680HPLCPump,ASI-100AutomatedSampledInjector,PDA-100PhtodiodeArrayDetecter，STH585ColumnOven)Chromeleon數據處理系統；賽多利斯萬(wàn)分之一電子天平（德國）；電子數控式恒溫水浴鍋（江蘇昆山醫用設備廠(chǎng)）；硅膠G，硅膠GF254（青島海洋化工廠(chǎng)生產(chǎn)）。

　　1.2樣品與試藥

　　婦科養坤丸：自制(批號050825，050903，050920)；去氫木香內酯對照品（供薄層鑒別用，批號111525-200404）；延胡索乙素對照品（供薄層鑒別用，批號110726-200409）；甘草次酸對照品（供薄層鑒別用，批號110723-200411），黃芩苷對照品（供含量測定用，批號110715-200514）均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；水為超純水，其他化學(xué)試劑均為分析純。

　　2方法與結果

　　2.1薄層鑒別

　　2.1.1黃芩的薄層鑒別取本品11g，研細，加醋酸乙酯-甲醇（3∶1）30ml，回流30min，濾過(guò)，蒸干，加5ml甲醇，取上清液作為供試品溶液。取去黃芩的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對照品溶液。取黃芩苷對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水-甲醇（5∶3∶0.6∶1.5∶0.8）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鐵試液，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無(wú)干擾。結果見(jiàn)圖1。

　　2.1.2木香的薄層鑒別取本品6g，研細，加氯仿10ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。取去木香的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對照品溶液。取去氫木香內酯對照品，分別加氯仿制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-乙醚（5∶3.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無(wú)干擾。結果見(jiàn)圖2。

　　2.1.3延胡索的薄層鑒別取本品11g，研細，加甲醇50ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，加濃氨試液調至堿性（pH9～10），用乙醚提取3次，10ml/次，合并乙醚液，用稀硫酸溶液提取3次，10ml/次，合并稀硫酸液，加氫氧化鈉試液調至堿性（pH11～12），再用乙醚提取3次，10ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取去延胡索的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對照品溶液。取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液與陰性對照溶液各10μl，對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-正丁醇-濃氨水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.8）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗黃色熒光斑點(diǎn)。陰性對照無(wú)干擾。結果見(jiàn)圖3。

　　2.1.4甘草的薄層鑒別取本品水蜜丸11g，研細，或大蜜丸18g，剪碎，加硅藻土12g，研勻，加乙醚60ml，加熱回流1h，濾過(guò)，藥渣加甲醇40ml，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，用水洗滌3次，蒸干，殘渣加入鹽酸5ml，再加氯仿50ml超聲提取30min，濾過(guò)，取氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液。取甘草次酸對照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品溶液。取缺甘草的其它藥材制成的蜜丸18g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法［1］試驗，吸取上述三種溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸（25∶9∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無(wú)干擾。結果見(jiàn)圖4。

　　2.2黃芩苷的含量測定

　　2.2.1色譜條件與系統適用性實(shí)驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為AgillentC18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇－0.1%磷酸溶液(47：53)；檢測波長(cháng)為280nm；流速1.0ml·min-1；柱溫25℃。理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低于2500。

　　2.2.2對照品溶液的制備精密稱(chēng)取在60℃減壓干燥4h的`黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每毫升含60μg的溶液，即得。

　　2.2.3供試品溶液的制備取本品10g，研碎，取約0.5g，精密稱(chēng)定，置100ml錐形瓶中，加70％乙醇50ml，精密稱(chēng)定，超聲提�。�150W，35kHz）30min，放冷，精密稱(chēng)定，以70％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續濾液，即得。

　　2.2.4專(zhuān)屬性實(shí)驗按處方比例和工藝，同法制成全方缺黃芩的的陰性對照液，按樣品供試液的制備方法制備，測定。表明:在與黃芩苷對照品色譜的相應位置上無(wú)干擾峰出現，說(shuō)明方中其它成分對測定結果無(wú)影響。黃芩苷對照品、供試品和陰性對照品的HPLC圖譜見(jiàn)圖5。

　　2.2.5線(xiàn)性關(guān)系考察取黃芩苷對照品溶液（0.060mg/ml）自動(dòng)進(jìn)樣1，5，10，15，20，25μl，按上述色譜條件設定峰面積，以峰面積（Y,mAu*sec）對進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程為Y=2220.2X-0.6294，r=0.9999；表明黃芩苷在0.0576～1.44μg內線(xiàn)性關(guān)系良好。

　　2.2.6精密度實(shí)驗取黃芩苷對照品溶液（0.060mg/ml），重復進(jìn)樣6次，10μl/次，按上述條件測得峰面積，RSD＝0.36%，表明精密度符合要求。

　　2.2.7穩定性實(shí)驗取對照品溶液和供試品溶液分別于0，2，4，8及12h，各自動(dòng)進(jìn)樣6μl，按上述色譜條件測定峰面積，對照品溶液和供試品溶液的RSD分別為0.87%，1.14%。表明12h內對照品和供試品均穩定。

　　2.2.8重復性實(shí)驗按上述的含量測定方法，對同一批樣品（批號：050825）制備供試液，平行做5份，測得峰面積，計算含量，結果RSD＝1.18%，表明重復性良好。

　　2.2.9加樣回收率實(shí)驗精密稱(chēng)取已知含量的同一批樣品(批號050825)6份，精密加入對照品適量，揮干溶劑，按供試品溶液制備項下操作。按色譜條件測定峰面積，計算回收率。結果見(jiàn)表1。表1加樣回收率實(shí)驗結果（略）

　　2.2.10樣品的測定取3批樣品按含量測定項下的方法提取、測定并計算含量，每份樣品測定3次取均值。結果見(jiàn)表2。表2樣品測定結果（略）

　　3討論［2,3］

　　黃芩苷為多酚羥基黃酮苷類(lèi)化合物，采用70％回流提取轉移率較高，但雜質(zhì)較多，經(jīng)比較，結果表明采用醋酸乙酯－甲醇（3∶1）回流提取，可顯著(zhù)減少水溶性雜質(zhì)的溶出；提取樣品含有較多脂溶性成分，在薄層上容易過(guò)載形成拖尾，影響鑒別，經(jīng)實(shí)驗，蒸干提取溶劑后的殘渣采用乙醚振搖提取可很好的去除大部分雜質(zhì)，黃芩苷基本無(wú)損失，乙醚不溶部分采用甲醇溶解，可獲得較好的重復性。甘草中甘草酸的穩定性較差，研究采用將甘草酸水解成甘草次酸進(jìn)行鑒別，可獲得較好的重復性。

　　本品中黃芩僅占全方藥材不足10%，因此理論溶媒用量較《中國藥典》為大；采用甲醇或乙醇提取可顯著(zhù)降低雜質(zhì)提取量，有利于保護色譜柱，故本次實(shí)驗分別對70％乙醇、無(wú)水乙醇、甲醇等提取溶媒的超聲提取30min，1，2h和回流提取2，3，4h進(jìn)行了考察，結果顯示采用70％乙醇超聲30min提取效果最好，操作簡(jiǎn)單、快速。

　　【參考文獻】

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